(Voolutsütomeetria, FCM) on rakuanalüsaator, mis mõõdab värvitud rakumarkerite fluorestsentsi intensiivsust. See on kõrgtehnoloogiline tehnoloogia, mis on välja töötatud üksikute rakkude analüüsi ja sorteerimise põhjal. See võimaldab kiiresti mõõta ja klassifitseerida rakkude suurust, sisemist struktuuri, DNA-d, RNA-d, valke, antigeene ja muid füüsikalisi või keemilisi omadusi ning võib põhineda nende klassifikatsioonide kogumisel.
Voolutsütomeeter koosneb peamiselt järgmistest viiest osast:
1 Voolukamber ja fluidikasüsteem
2 Laservalgusallikas ja kiire kujundamise süsteem
3 Optiline süsteem
4 Elektroonika-, salvestus-, kuvamis- ja analüüsisüsteem
5 Rakkude sorteerimissüsteem
Nende hulgas on laserkiire ergastamine laservalgusallikas ja kiire moodustamise süsteemis fluorestsentssignaalide peamine mõõtmine voolutsütomeetrias. Ergastava valguse intensiivsus ja säritusaeg on seotud fluorestsentssignaali intensiivsusega. Laser on koherentne valgusallikas, mis suudab pakkuda ühe lainepikkusega, suure intensiivsusega ja suure stabiilsusega valgustust. See on ideaalne ergastusvalgusallikas nende nõuete täitmiseks.
Laserallika ja voolukambri vahel on kaks silindrilist läätse. Need läätsed fokuseerivad laserallikast kiirgava ümmarguse ristlõikega laserkiire väiksema ristlõikega elliptiliseks kiireks (22 μm × 66 μm). Selle elliptilise kiire sees olev laserenergia jaotub normaaljaotuse järgi, tagades laseri tuvastusala läbivate rakkude ühtlase valgustusintensiivsuse. Optiline süsteem koosneb aga mitmest läätsede, nõelaaukudest ja filtritest, mida saab laias laastus jagada kahte rühma: voolukambrist üles- ja allavoolu.
Voolukambri ees olev optiline süsteem koosneb läätsest ja nõelaaugust. Läätse ja nõelaaugu (tavaliselt kaks läätse ja nõelaaugu) peamine ülesanne on fokuseerida laserallikast kiirgav ümmarguse ristlõikega laserkiir väiksema ristlõikega elliptiliseks kiireks. See jaotab laseri energia normaaljaotuse järgi, tagades rakkudele ühtlase valgustusintensiivsuse kogu laseri tuvastamise piirkonnas ja minimeerides hajameelse valguse häireid.
Filtreid on kolme peamist tüüpi:
1: Pikkpääsfilter (LPF) – laseb läbi ainult valgust, mille lainepikkus on suurem kui teatud väärtus.
2: Lühipääsfilter (SPF) – laseb läbi ainult valgust, mille lainepikkused on alla teatud väärtuse.
3: Ribapääsfilter (BPF) – laseb läbi ainult teatud lainepikkuste vahemikus olevat valgust.
Erinevad filtrite kombinatsioonid võivad suunata erinevatel lainepikkustel fluorestsentssignaale üksikutele fotokordistitele (PMT-dele). Näiteks rohelise fluorestsentsi (FITC) tuvastamiseks PMT ees on filtrid LPF550 ja BPF525. Oranži-punase fluorestsentsi (PE) tuvastamiseks PMT ees kasutatakse filtreid LPF600 ja BPF575. Punase fluorestsentsi (CY5) tuvastamiseks PMT ees on filtrid LPF650 ja BPF675.
Voolutsütomeetriat kasutatakse peamiselt rakkude sorteerimiseks. Arvutitehnoloogia arengu, immunoloogia arengu ja monoklonaalsete antikehade tehnoloogia leiutamisega on selle rakendused bioloogias, meditsiinis, farmaatsias ja muudes valdkondades üha laialdasemalt levinud. Nende rakenduste hulka kuuluvad rakkude dünaamika analüüs, rakkude apoptoos, rakkude tüpiseerimine, kasvajate diagnoosimine, ravimite efektiivsuse analüüs jne.
Postituse aeg: 21. september 2023
