(Flow Cytometry, FCM) on rakuanalüsaator, mis mõõdab värvitud rakumarkerite fluorestsentsi intensiivsust. See on kõrgtehnoloogiline tehnoloogia, mis on välja töötatud üksikute rakkude analüüsil ja sorteerimisel. Sellega saab kiiresti mõõta ja klassifitseerida rakkude suurust, sisemist struktuuri, DNA-d, RNA-d, valke, antigeene ja muid rakkude füüsikalisi või keemilisi omadusi ning see võib põhineda nende klassifikatsioonide kogumisel.
Voolutsütomeeter koosneb peamiselt järgmisest viiest osast:
1 Voolukamber ja vedelikusüsteem
2 Laservalgusallikas ja valgusvihu kujundamise süsteem
3 Optiline süsteem
4 Elektroonika-, salvestus-, kuvamis- ja analüüsisüsteem
5 Rakkude sorteerimissüsteem
Nende hulgas on laseriga ergastamine laservalgusallikas ja kiirte moodustamise süsteemis peamine fluorestsentssignaalide mõõtmine voolutsütomeetrias. Ergastusvalguse intensiivsus ja säriaeg on seotud fluorestsentssignaali intensiivsusega. Laser on koherentne valgusallikas, mis suudab pakkuda ühe lainepikkusega, suure intensiivsusega ja kõrge stabiilsusega valgustust. See on nende nõuete täitmiseks ideaalne ergastav valgusallikas.
Laseriallika ja voolukambri vahel on kaks silindrilist läätse. Need läätsed fokuseerivad laseriallikast väljastatud ümmarguse ristlõikega laserkiire väiksema ristlõikega (22 μm × 66 μm) elliptiliseks kiireks. Laseri energia selles elliptilises kiires jaotub vastavalt normaaljaotusele, tagades lasertuvastusala läbivatele rakkudele ühtlase valgustuse intensiivsuse. Teisest küljest koosneb optiline süsteem mitmest läätsede, tihvtide ja filtrite komplektidest, mida saab laias laastus jagada kahte rühma: voolukambrist üles- ja allavoolu.
Voolukambri ees olev optiline süsteem koosneb läätsest ja nõelaaugust. Läätse ja nööpnõela (tavaliselt kaks läätse ja nööpaugu) põhiülesanne on fokuseerida laserallika poolt väljastatav ümmarguse ristlõikega laserkiir väiksema ristlõikega elliptiliseks kiireks. See jaotab laseri energia vastavalt normaalsele jaotusele, tagades rakkude ühtlase valgustuse intensiivsuse kogu lasertuvastusalal ja minimeerides hajuva valguse häireid.
Filtreid on kolme peamist tüüpi:
1: Long pass filter (LPF) – lubab läbida ainult valgust, mille lainepikkus on suurem kui konkreetne väärtus.
2: lühipääsfilter (SPF) – lubab läbida ainult valgust, mille lainepikkus on alla teatud väärtuse.
3: Bandpass filter (BPF) – lubab läbida ainult teatud lainepikkuse vahemikus valgust.
Erinevad filtrite kombinatsioonid võivad suunata erinevatel lainepikkustel fluorestsentssignaale üksikutele fotokordisti torudele (PMT). Näiteks filtrid rohelise fluorestsentsi (FITC) tuvastamiseks PMT ees on LPF550 ja BPF525. Oranžikaspunase fluorestsentsi (PE) tuvastamiseks PMT ees kasutatakse filtreid LPF600 ja BPF575. Filtrid punase fluorestsentsi (CY5) tuvastamiseks PMT ees on LPF650 ja BPF675.
Voolutsütomeetriat kasutatakse peamiselt rakkude sorteerimiseks. Arvutitehnoloogia edenedes, immunoloogia arengu ja monoklonaalsete antikehade tehnoloogia leiutamisega on selle rakendused bioloogias, meditsiinis, farmaatsias ja muudes valdkondades üha laiemalt levinud. Need rakendused hõlmavad rakkude dünaamika analüüsi, raku apoptoosi, rakkude tüpiseerimist, kasvaja diagnoosimist, ravimite efektiivsuse analüüsi jne.
Postitusaeg: 21. september 2023
